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此参数对于采用负反应分析酶活性的方法甚为重要,下面以丙氨酸氨基转移酶为例简述设置的步骤,选择一份高活性酶的混合血清,用生理盐水稀释,得到一组从低浓度至高浓度的丙氨酸氨基转移酶溶液;把这一组溶液按仪器设定的程序进行测定,并打印出反应曲线;从曲线中可以发现当酶活力达到一定临界浓度时,该临界浓度的反应曲线在连续监测时间内成线性,但是在监测时间后成非线性,即连续监测时间的后一个读数点正好是线性与非线性的临界点,所以该点的吸光度是在连续监测时间内酶促反应没有发生底物耗尽时所能达到的小吸光度值,这个小。
超过限额说明样品的酶活性非常高,底物消耗太快,在仪器程序规定的线性反应期内吸光度的变化往往不代表真正的酶活力,导致结果偏低,该样品应稀释一定的倍数重新测定。当酶活力高于上述临界浓度时,反应曲线在连续监测期内已不呈线性反应,有些仪器自动选择弹性速率功能,能自动选择反应曲线上连续监测期内仍呈线性的吸光度数据计算结果,使酶活性测定的线性范围得以扩大,可以减少稀释及重测次数降低成本。试剂吸光度上限下限试剂吸光度上限为正向反应用,可参考试剂盒说明书数值折算成所用比色杯的光径。
如试剂盒要求上限为,比色杯光径cm,则试剂吸光度上限设置为。试剂吸光度下限为负向反应用,设置法同试剂吸光度上限。每种试剂都有一定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质,此时应更换合格试剂。线性范围试剂盒的线性范围与试剂质量反应时试剂/样品比有关,应实测试剂盒的线性范围。当样品浓度低于线性下限应增加样品量重测,而高于线性上限则应稀释后重测。使用任何一种方法测定某待测物时,待测物都有一个可测定的浓度或活性范围,样品结果若超过此范围,仪器将显示测定结果超过线性范围的提示,多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。质量把关
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